A cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) é uma técnica cromatográfica voltada à separação de macromoléculas quanto ao seu tamanho, de acordo com sua capacidade de penetração em poros de partículas que compõem uma fase estacionária. Estes leitos podem ser constituídos por sílica ou polímeros como polimetacrilatos ou copolímeros de estireno e divinilbenzeno.
Algumas das principais aplicações de SEC com partículas poliméricas incluem:
- Análise de polissacarídeos e seus relacionados (dextrana, pululan, CMC, hipromelose, mucopolissacarídeos,…);
- Análise de substâncias ativas como ácido hialurônico, condroitina;
- Outros excipientes como PEG.
Exemplo de curva de cromatograma de SEC
A técnica gira em torno do estudo de um “volume vazio” (V0) e um “volume de penetração de poros” (Vi). Em tese, um cromatograma de SEC encontra-se entre o valor de V0 e (V0+Vi), demonstrando exclusão de tamanho e liberdade máxima de penetração nos poros das partículas que constituem o leito. Qualquer fuga desta faixa pode indicar interações intermoleculares secundárias indesejadas como repulsão ou atração eletrostática ou interações de Van der Waals (alta hidrofobicidade), duas situações que podem ser corrigidas com alterações de composições de fase móvel como a utilização de soluções tampão ou emprego de solventes orgânicos em pequenas quantidades como 10 %.
