Um composto que aparece no leite tratado pelo calor é a lactulose, que pode ser utilizada como indicador de aquecimento do leite. A lactulose pode ser derivada da lactose por isomerização alcalina ou transgalactosilação enzimática da frutose. Uma vez em solução, a lactulose é menos estável do que a lactose em um ambiente alcalino e pode se degradar em galactose, tagatose e ácidos de baixo peso molecular.
A Farmacopeia dos Estados Unidos (USP) descreve a separação da lactulose juntamente com a lactose e galactose, bem como traços de outros açúcares relacionados. O método da USP descreve que a separação por HPLC é realizada em uma coluna de suporte de sílica funcionalizada com amino propil (L8). Aqui, descrevemos uma separação aprimorada para lactulose, epilactose e lactose na coluna Shodex VG-50 4E, uma coluna HILIC amino.
A Shodex apresenta a coluna VG-50 4E, preenchida com um material de empacotamento durável à base de polímero modificado com grupos funcionais de amina terciária quimicamente estáveis. A Shodex VG-50 4E é adequada para análise de sacarídeos e fornece um método rápido e confiável para a determinação de lactose e lactulose.
Condições Experimentais
A análise dos três dissacarídeos foi realizada com a coluna Shodex VG-50 4E (4,6 × 250 mm, 5 μm), uma coluna HILIC amino à base de polímero. A temperatura da coluna foi de 40 °C e a taxa de fluxo foi de 1,0 mL/min para a análise com a VG-50 4E. As proporções dos solventes da fase móvel foram 75:20:5 para acetonitrila:metanol:água. Um volume de injeção de 5 μL de 5 mg/mL de cada açúcar foi utilizado para o experimento. O sistema de HPLC foi acoplado a um detector de RI.
Resultados
Lactulose, lactose e epilactose foram separadas com sucesso por HILIC e detecção por RI com a VG-50 4E (Figura 1). A Shodex VG-50 4E demonstra separação de linha de base dos três açúcares com um volume de eluição inferior a 15 minutos, com a ordem de eluição da lactulose, seguida pela epilactose e, por último, lactose. A monografia da USP descreve a ordem de eluição como primeiro epilactose, lactulose e depois lactose, com resolução entre lactulose e lactose não inferior a 1,5 e resolução entre lactulose e epilactose não inferior a 0,9. A análise da Shodex demonstra uma resolução entre lactulose e epilactose de 2,29 e uma resolução entre epilactose e lactose de 1,98
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Figura 1: Cromatograma da 1. lactulose, 2. epilactose, 3. lactose.
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