A LSD1 (demetilase 1 específica para lisina) é uma enzima que remove grupos metil de resíduos específicos de lisina na histona H3. As histonas são proteínas que organizam o DNA dentro do núcleo celular e regulam a expressão gênica, controlando o grau de compactação do DNA.
Quando a atividade da LSD1 está desregulada, especialmente quando ocorre sua superexpressão, ela está associada a vários tipos de câncer. Por isso, a LSD1 se tornou um alvo terapêutico importante para diversas empresas farmacêuticas que desenvolvem tratamentos oncológicos baseados em pequenas moléculas direcionadas.
O composto apresentado na Figura 1, desenvolvido pelo grupo da professora Liau, da Universidade de Harvard, é um intermediário-chave na síntese de uma biblioteca de potenciais novas terapias contra a LSD1. Estudos anteriores realizados pelas empresas Takeda e GlaxoSmithKline mostraram que a estereoquímica trans (R,R) desse composto é a mais eficaz para inibir a enzima. Por isso, é fundamental separar o enantiômero trans (S,S), que apresenta menor eficácia, para garantir a seletividade e a robustez dos resultados experimentais.
Para escolher a coluna quiral com melhor seletividade para os enantiômeros, foi realizada uma triagem com diversas colunas CHIRALPAK®, incluindo os modelos IA, IB N5, IC, ID, IE, IF, IG, IH, IJ, IK, IM e IN, todas com 4,6 mm de diâmetro interno, 250 mm de comprimento e partículas de 5 µm.
Antes de iniciar a triagem completa, foi feita uma verificação preliminar da retenção para garantir uma eluição adequada. Uma única injeção foi realizada na coluna IB N-5, utilizando duas fases móveis: hexano-etanol e hexano-isopropanol na proporção 70:30 (v/v). As melhores separações, avaliadas pela seletividade, ocorreram na coluna IK com etanol como fase móvel.
Para melhorar ainda mais a separação e aumentar o rendimento na escala preparativa, utilizou-se uma fase móvel com menor poder eluente, na proporção 80:20 hexano-etanol. Essa condição possibilitou a separação mostrada na Figura 2.
Para estimar a produtividade em condições preparativas, 20 miligramas do composto foram dissolvidos na fase móvel. Em seguida, foram realizadas injeções com volumes progressivamente maiores (conforme ilustrado na Figura 3), até o ponto em que a cauda do primeiro pico começasse a se sobrepor à frente do segundo pico, indicando o limite ideal de separação.
Com base na carga da amostra (500 µl de uma solução a 20 mg/mL) e no tempo de cada corrida cromatográfica (6 minutos), calculou-se uma produtividade de 100 mg por hora utilizando uma coluna analítica de 4,6 x 250 mm.
Você sabia que a Daicel oferece um serviço de triagem de colunas com diferentes fases estacionárias?
É isso mesmo! Com esse serviço, disponível no Brasil por meio da Acore Consumíveis, representante exclusiva da Daicel, o seu desafio analítico pode ser resolvido com muito mais praticidade e eficiência.
Ao invés de investir na compra de várias colunas ou tentar adivinhar qual fase estacionária utilizar, você pode contar com o know-how da Daicel. Isso é especialmente importante quando falamos de separações quirais, cujos mecanismos de interação são bem mais complexos do que os de fases estacionárias convencionais, como C18.
Nosso serviço permite testar seus enantiômeros nas renomadas colunas Daicel com seletores quirais à base de polissacarídeos, líderes globais em separações enantiosseletivas.
Quer saber como podemos ajudar no seu desenvolvimento analítico? Fale com a gente!
