Em cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE/HPLC) e, principalmente, em UHPLC, o encaixe correto das tubulações entre as conexões é fundamental. Quando a extremidade do tubo não alcança completamente o ponto de encaixe na entrada da coluna, forma-se um volume adicional no caminho da amostra.
Esse volume morto (dead volume) permite que a banda da amostra se disperse antes mesmo de entrar na coluna, contribuindo para a chamada dispersão extracoluna.
Na prática: ↑ dispersão extracoluna → pico mais largo → ↓ eficiência observada
Esse efeito se torna especialmente importante em colunas com partículas menores que 3 µm. Como essas colunas apresentam alta eficiência, a contribuição do próprio sistema para o alargamento dos picos passa a ser proporcionalmente mais relevante.
E aqui está um detalhe que pode passar despercebido durante o troubleshooting: a geometria da conexão também importa.
Colunas de diferentes fabricantes podem apresentar diferenças nos padrões de conexão, especialmente na geometria do fitting e na posição de encaixe do tubo. Por isso, utilizar simplesmente “qualquer” conexão de alta pressão pode não ser suficiente para garantir um encaixe adequado e minimizar o volume morto.
A GL Sciences possui a linha High-Pressure Fittings, desenvolvida para atender diferentes padrões de conexão e equipada com anilha em dois materiais (aço inox e peek), que favorece o encaixe correto do tubo e ajuda a minimizar o volume morto no sistema.
No troubleshooting cromatográfico, não olhe apenas para a coluna. O caminho que a amostra percorre até chegar a ela também pode aparecer no seu cromatograma.
Antes de concluir que a coluna perdeu desempenho, verifique a conexão.
Entre em contato com a Acore para mais detalhes: